爱绿舒对断奶仔猪生产性能、免疫机能及肠道菌群的影响

1 目的

      本试验研究在保育料中添加不同水平的爱绿舒对断奶仔猪生产性能、免疫机能和肠道菌群的影响。

2 材料和方法

2.1 试验设计

      采用单因子试验设计，选择28日龄体重（8.68±0.15）kg长大二元杂交断奶仔猪225头，设5处理，分为对照组、试验1组、试验2组、试验3组和试验4组，每个处理5个重复，每个重复9头，每1栏
为1个重复。研究爱绿舒替代抗生素对断奶仔猪生产性能的影响。正式试验期从2018年5月29日-2018年6月25日，共28天，试验期从5月23日-5月28日预饲了6天，6月27日对25头试验猪进行屠宰取样，
具体试验设计见表1。

2.2 试验动物的选择与饲养管理

      试验地点是在河北汉唐牧业有限公司，选择225头35日龄、体重（8.68±0.15）kg长大二元杂交断奶仔猪，按“体重、胎次、日龄、性别”一致的原则随机分成5组，每组5个重复，每个重复9头猪，
每1栏为1个重复。试验设对照组、试验1组、试验2组、试验3组和试验4组，试验期内各组猪分别采食相应日粮，试验期30天。

      试验猪采用圈养的方式，自由采食，自由饮水，室内温度控制在20-25℃，湿度80%-85%；每天定时饲喂(8:00、12:00、16:00和20:00)，每次饲喂以饲槽中略有余料为宜；其它饲养管理按照猪场常
规进行。

2.3 试验日粮

      参照NRC1998乳猪（7-15kg）的营养需要进行配制，试验饲粮为粉料，爱绿舒（通用型）由北京爱绿生物科技有限公司提供。

2.4 测定指标

2.4.1 生产性能

      平均日增重（ADG）：分别于试验第1日龄和第28天早晨空腹称重，计算各生长阶段的ADG；

      平均日采食量（ADFI）：每天以重复为单位记录日采食量，然后于第14天和第28天以重复为单位计算耗料量，并计算每个重复的ADFI；

      料重比（F/G）：根据增重和采食量计算F/G。

2.4.2 仔猪腹泻频率和腹泻指数的评定

      每天早上9:00和下午3:00以重复为单位观察记录每头猪腹泻的情况，观察粪便性状，以最高分作为当天的腹泻指数，腹泻频率=腹泻次数/(猪总头×2)×100%，腹泻指数=腹泻评定总分数/（猪总头×3
×2）×100%。

2.4.3 仔猪皮毛指数

      在试验1天、第14天和第28天分别对乳猪的外观进行评分。皮毛得分=皮肤红润程度+毛色亮度+毛顺程度，具体评定方法见表3。

2.4.4 死亡率、成活率

      试验期间每天记录死亡猪体重，并记录每栏猪数量。

      死亡率（%）=死亡猪/总猪头数×100；

      成活率（%）=100%-死亡率。

2.4.5免疫机能测定

（1）免疫器官发育指数（胸腺、脾脏、淋巴结）:免疫器官发育指数=（免疫器官重量/猪体重）×100%；

（2）血液生理生化指标：总蛋白、白蛋白、C3、C4、IgA、IgG和IgM、IL-2、IL-4、干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）；

（3）免疫器官中CD4+、CD8+细胞检测：Elisa试剂盒检测。

2.4.6肠道形态结构测定

取十二指肠、空肠、回肠肠断进行固定，将固定的样品经冲洗、脱水、透明、浸蜡、包埋等处理后切片，进行苏木精－伊红染色，显微照相，测量绒毛长度及隐窝深度，计算绒毛长度与隐窝深度的
比值，并计算绒毛高度与隐窝深度的比值（VH/CD，VCR），各指标取平均数作为测定数据。

2.4.7常规营养成分及消化率测定

采用内源指示剂（4N盐酸不溶灰分）方法测定能量、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、钙的表观消化吸收率。表观消化率计算采用内源指示剂法，计算公式如下：

某养分消化率（%）=100-100*（b*c）/（a*d）。其中：

a：饲料中某养分含量； b：粪样中某养分含量；

c：饲料中酸不溶灰分含量；d：粪样中酸不溶灰分含量。

2.5 统计分析

      结果用平均数±标准差表示，数据统计分析采用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），采用Duncan’S检验进行多重比较。

3 结果

      将各处理组断奶仔猪肠道（空肠）微生物样品进行测序，并统计各样本的α多样性指数后得到各样本 OTU 数目分别为276（对照组）、262（试验Ⅰ组）、266（试验Ⅱ组）、302（试验Ⅲ组）、289（试验Ⅳ组）。Chao1 指数、ACE 指数和Shannon指数 、Simpson 指数表示微生物群落结构的变化状况。其中，Chao1 指数和ACE 指数越高，表明群落丰富度越高，Shannon指数越高，表明群落物种的多样性越高。

      由上表所示，与对照组和试验Ⅳ组相比，试验Ⅲ组中ACE 指数增加，且显著高于试验Ⅰ组和试验Ⅱ组；Chao1指数高于对照组、试验Ⅰ和Ⅱ组，结果表明，断奶仔猪日粮中添加500g/T的爱绿舒能够增加空肠微生物菌群的丰富度。与对照组和其他处理组相比，试验Ⅲ组中Shannon指数均高于对照组和其他处理组，结果表明，断奶仔猪日粮中添加500g/T的爱绿舒能够增加空肠微生物菌群的多样性。

      综上，我们发现，日粮中添加500g/T爱绿舒能够提高断奶仔猪空肠微生物菌群的丰富度和多样性，从而影响肠道微生物菌群的组成。

（河北农业大学）