爱绿舒在加州鲈养殖中的应用研究

1  试验背景

加州鲈原名大口黑鲈，分类学上属鲈形目，太阳鱼科，原产美国加利福尼亚州密西西比河水系，是一种肉质鲜美、抗病力强、生长迅速、易起捕、适温较广的名贵肉食性鱼类。我国于上世纪80年
代引进加州鲈鱼苗，并人工繁殖成功。2018年全国加州鲈产量达43.21万吨，成为名副其实的明星鱼。虽然现在加州鲈的苗种驯化、养殖、饲料技术等日趋成熟，但普遍还存在放养密度过大、投喂过
量、水质底质恶化、频繁消毒用药、投喂冰鲜鱼等情况。这些情况都会导致加州鲈发生肝脏病变，造成鱼体免疫力下降、代谢紊乱、易感染其他病原性疾病，死亡率增高，有的塘口死亡率可高达50%
以上，给养殖户造成重大的经济损失。

另外，加州鲈养殖中为了追求生长速度，过度投喂饲料或者是冰鲜，由于加州鲈摄食量大，投喂的饲料或冰鲜也多，过多的投喂造成浪费会残留在水体中造成水体的污染，当水质变化，溶氧低等
引起鱼体抵抗力下降，会使得加州鲈患肠炎病的几率大大增加。因此加州鲈的肝肠问题亟待解决。

爱绿舒^®主要成份组成：黄芪提取物、杜仲提取物、金银花提取物、苦木提取物等植提复方，具有“抑菌杀菌与抗病毒+提高免疫与抗病力+保护胃肠黏膜屏障”三位一体综合改善肝肠健康，提高
抗病力、促生长的效果。本试验以加州鲈为研究对象，评价爱绿舒在加州鲈养殖中的应用效果，重点考察爱绿舒对加州鲈生长性能、免疫功能和肝肠健康的改善作用。

2  试验目的

研究饲料中添加不同水平爱绿舒对加州鲈生长、消化、免疫功能及抗应激的影响，确定爱绿舒的应用效果及饲料中最佳添加水平。

3  试验设计

3.1  试验对象

选择加州鲈为试验动物，初均重5.3g左右。

3.2  试验组别

每个处理3个重复，每个重复25尾加州鲈，试验周期8周。      

养殖条件：每天2次（8:00和16:00）表观饱食投喂。整个养殖系统不间断充气, 水体溶解氧含量≥6mg/L, 氨氮为（0.15±0.05）mg/L, pH 为（7.2±0.2）, 温度为（25±2）℃ 。养殖实验期间采用自然光
照周期。 

利用试剂盒分析血清免疫指标、肝脏抗氧化和消化酶指标，高通量测序分析肠道微生物组成，组织切片法和电镜分析肝脏及肠道组织形态。

4  试验结果

4.1 爱绿舒对加州鲈生长性能的影响

由表2可知，饲料中添加0.03%、0.05%、0.075%和0.1%爱绿舒，养殖试验期间加州鲈存活率均为100%，增重率、特定生长率、采食量均出现不同程度的提高。其中，饲料中添加0.075%爱绿舒的加州鲈
增重率、特定生长率、采食量均显著增加（P＜0.05），增重率较对照组增加了9.62%。饲料中添加爱绿舒的加州鲈平均肥满度有一定程度提高，鱼体形态更为美观。这些结果提示饲料中添加一定量的爱绿舒能
提高加州鲈采食量和生长性能，改善形体指标。

4.2 爱绿舒对加州鲈血清免疫指标的影响

由表3可知，饲料中添加0.03%、0.05%、0.075%和0.1%的爱绿舒均显著提高了加州鲈血清AKP活性（P＜0.05），实验组和对照组血清ACP和IgM差异不显著，添加0.05%、0.075%和0.1%的爱绿舒血清
补体C3活性有一定上升。这些结果提示爱绿舒能一定程度上提高加州鲈免疫功能。

4.3 爱绿舒对加州鲈肝脏消化和代谢酶活性的影响

由表4可知，饲料中添加0.03%、0.05%、0.075%和0.1%的爱绿舒各组淀粉酶活性无显著差异，脂肪酶活性呈不同程度上升，其中0.03%组显著上升（P＜0.05）。饲料中添加0.03%和0.1%的爱绿舒肝脏
胰蛋白酶活性显著下降（P＜0.05），饲料中添加0.05%、0.075%的爱绿舒肝脏胰蛋白酶活性无显著影响。饲料中添加爱绿舒加州鲈肝脏ALT活性均显著高于对照组，AST活性高于对照组，但差异不显著。这
些结果提示饲料中添加一定含量的爱绿舒能够改善加州鲈肝脏代谢。

4.4 爱绿舒对加州鲈肝脏抗氧化能力的影响

由表5可知，饲料中添加0.03%、0.05%、0.075%和0.1%的爱绿舒均能提高加州鲈肝脏总氧化酶活性，其中0.075%爱绿舒组试验结果最为明显，总抗氧化能力活性较对照组提高了71.4%，并明显降低了
加州鲈肝脏MDA含量。0.05%爱绿舒能显著提高加州鲈肝脏GSH-PX活性，0.03%爱绿舒能显著提高加州鲈肝脏SOD活性（P＜0.05）。这些结果提示饲料中添加爱绿舒可提高加州鲈抗氧化能力。

4.5 爱绿舒对加州鲈肝脏组织形态的影响

根据现场采样情况（图1），采集的肝脏颜色总体呈暗红色，形态正常，均未出现脂肪肝现象，就整体而言，试验组的肝脏体积较对照组稍大一点，其他并无显著差异。

由图2可观察，加州鲈伸入肝脏实质内结缔组织较少肝组织致密，肝小叶间界线不是十分明显，低倍镜下可大致区分出肝小叶和门管区结构。肝小叶以中央静脉为中心，肝细胞索在其周围呈不规则的放
射状排列，胆细胞索间的血窦较为明显。结果提示在饲料中添加爱绿舒并不会对肝脏的组织形态造成影响。

4.6 爱绿舒对加州鲈肠道组织结构及其屏障的影响

根据图3显示，加州鲈肠道黏膜为纵行黏膜褶皱，黏膜上皮表面具有许多分泌孔及较多腺体导管的开口，似鳞片状，连接紧密。肠黏膜分布着密集排列的肠绒毛，绒毛呈拇指状或扁平状。肠上皮表面呈
脑回状分布有许多分泌颗粒，细胞游离面分布着丰富的微绒毛，其中0.075%试验组较对照组褶皱更加紧密，肠绒毛更为密集，分布着更为丰富的微绒毛。

肠上皮屏障是由肠上皮细胞和细胞间的紧密连接所构成，紧密连接是处于细胞间最顶端的结构，负责细胞与细胞间的粘附，极性以及对一些电解质的通透性。一旦粘膜屏障被破坏，粘膜下层将会暴露于
大量的病原微生物下，从而加剧肠道炎症的发展，因此维持紧密连接蛋白的表达正常对于保护肠道屏障，具有重要意义。因此我们检测了空肠紧密连接蛋白相关基因ZO-1、Claudin-1和Claudin-4基因相对
表达水平，从图4中可以看出，与正常对照组比较，0.03%、0.05%和0.075%爱绿舒处理组空肠紧密连接蛋白相关基因ZO-1、Claudin-1和Claudin-4的基因相对表达水平均有不同程度的提高，其中0.075%
爱绿舒处理组空肠紧密连接蛋白相关基因ZO-1、Claudin-1和Claudin-4的基因相对表达水平提高最为显著（P＜0.05）。可见，饲料中添加爱绿舒可以改善加州鲈肠道组织结构，并且有利于提高肠道物理屏
障相关基因的表达。 

4.7 爱绿舒对加州鲈肠道微生物的影响

由图5可知，在门水平，各组加州鲈肠道的优势菌为厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、酸杆菌门、放线菌门等，0.075%试验组厚壁菌门、拟杆菌门丰度略低于对照组，而梭杆菌门丰度明显上升。在属水
平，0.075%试验组鲸杆菌（常见有益菌）丰度明显上升。PCoA分析和β-多样性显著性分析（图6）均表明，试验组与对照组加州鲈肠道菌群β-多样性存在一定差异，尤其是0.075%试验组差异较大。可见，
饲料中添加爱绿舒对加州鲈肠道菌群结构产生了一定的调节作用。

5 试验结论

5.1  饲料中添加0.03-0.10%的爱绿舒均能提高加州鲈采食量、生长性能和肥满度。0.075%添加效果最佳，增重率较对照组提高了9.62%。

5.2 饲料中添加0.03-0.10%的爱绿舒能改善加州鲈免疫功能、抗氧化能力和肝脏代谢。

5.3 饲料中添加0.075%的爱绿舒能有效改善加州鲈肠道组织结构和菌群结构，上调肠道物理屏障相关基因的表达。

      综上，加州鲈饲料中爱绿舒的建议添加量为0.075%（750g/T）。

（集美大学）