植物抗球虫剂爱绿爽与鸡球虫疫苗协同作用研究

1 试验目的

植物提取物类产品多数通过提高肠道免疫功能、黏膜修复以及抑制球虫发育等而起到一定的抗球虫作用。艾美耳球虫对鸡肠道破坏严重，严重混合感染时病变可扩展到肠道大部分范围，不但会影响鸡
生长发育，还会影响到养鸡业生产经济效益。本试验主要通过动物试验并观察各项指标，分析植物抗球虫剂爱绿爽与鸡球虫四价疫苗在黄鸡上联合使用的协同作用，从而为生产上鸡球虫病的科学防控提供
依据。

2 材料与方法

2.1 材料

供试药物：爱绿爽（Ⅰ型）、甲基盐霉素。

供试鸡：黄鸡鸡苗在无球虫环境下饲养，饮用洁净自来水，在1日龄分组、称重，根据分组情况分别饲喂含有爱绿爽、甲基盐霉素以及不含抗球虫药的全价粉料。

供试饲料：基础日粮为按黄羽肉鸡标准生产的不含抗球虫药的全价粉料。

供试强毒卵囊：四种艾美耳球虫（柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球虫）强毒卵囊，由佛山市正典生物技术有限公司分离、鉴定和扩繁。

供试球虫疫苗：佛山市正典生物技术有限公司生产的四价苗（含柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球虫）。

试验时间：2019.09.10～10.29，共计50天。

2.2 方法

2.2.1 分组与免疫

将1日龄试验黄羽肉鸡随机分成15组，每组为100只（3个重复组），按表1处理，地面平养，养至5日龄，免疫组接种球虫四价疫苗1羽份/鸡，具体如表1所示。于免疫后3周（26日龄）每组各取20只鸡
称重、笼养并进行攻虫试验（其中不处理对照组每组取40只鸡，分为不攻虫的阴性对照组20只和攻虫的阳性对照组20只）。

2.2.2 观察指标

（1）球虫卵囊数监测：

分别于12日龄、19日龄、26日龄、33日龄攻毒前每组收集4堆小肠粪和1堆盲肠粪进行卵囊监测（判断免疫后卵囊排出量是否正常，爱绿爽对免疫过程中卵囊排出量的影响）。

（2）存活率、增重和料肉比：

①存活率：

存活率（%）＝存活鸡数÷开始鸡数×100%

②增重情况：

对于黄羽肉鸡试验，分别于1日龄、21日龄、51日龄等阶段进行分组称重（包括料重和鸡重），计算各阶段和全过程的平均增重、相对增重和料肉比。

1)平均增重=（最后存活的鸡只数的总重/存活的鸡只数）-（开始的鸡只的总重/开始时的鸡只数）

2)相对增重率=（用药组或感染不用药组的平均增重/不感染不用药组的平均增重）×100%

3)料肉比= 消耗饲料总量（kg）／增重总量（kg）

（3）通过攻虫试验观察抗球虫效果的指标

26日龄时每组抽取20只，除第1、2、3组外，黄羽肉鸡试验其他各组（包括阳性对照组）每鸡经口感染柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球虫强毒孢子化卵囊各6万、6万、6万、5万共23万。指标如下：

①存活率：

存活率（%）＝存活鸡数÷开始鸡数×100%

②卵囊计数：

分别收集各组试验鸡感染后足144～168 h的粪便，用麦氏计数板法计每克粪便卵囊数，检测各粪便中的卵囊含量，计算卵囊产量和卵囊值。

卵囊值：当阴性组或用药组 OPG 值与阳性组 OPG 值的比值分别为小于 1%、1%～25%、25%～50%、50%～75%和 75%～100%时，卵囊值分别为 0，5，10，20 和 40。

③病变计分：

攻虫后5天每组随机宰杀5只鸡，逐羽观察小肠和盲肠病变，将肠道病变分为0～+4五个等级。

④根据相对卵囊产量（ROP）、病变记分减少率（RLS）评价耐药性和抗球虫效果：

a.相对卵囊产量（ROP）=（感染用药组卵囊产量/感染不用药组卵囊产量）×100%；

ROP<15%，判为耐药阴性；ROP≥15%，判为耐药阳性。

b.病变记分减少率（RLS）；

RLS =（感染不用药组平均病变记分－感染用药组平均病变记分）/ （感染不用药组平均病变记分）×100%；

RLS<50%，判为耐药阳性；RLS≥50%，判为耐药阴性。其中RLS值小于等于30%，判为完全耐药；RLS值在31～50%之间，判为部分耐药。

3 试验结果

3.1 地养鸡观察指标

3.1.1 地养鸡球虫卵囊数监测

从表2和图1所示，不处理对照组卵囊数量随日龄增长，表明外界存在野毒虫株；26日龄前爱绿爽不免疫组和化药对照组卵囊数均低于不处理对照组，表明爱绿爽和化药甲基盐霉素对球虫感染有抑制作
用；26日龄后随着球虫感染数量的增加，抑制作用减弱。

免疫对照组在监测期间卵囊排量一直处于上升趋势，可能受外界球虫的侵袭和堆型艾美耳球虫强繁殖力影响，堆型艾美耳球虫免疫力的建立延后。

爱绿爽免疫组在免疫后3周到达排卵高峰后平稳下降，表明爱绿爽免疫组黄羽肉鸡已建立良好的免疫保护力。免疫后7日龄后，在外界球虫的侵袭下，爱绿爽免疫组卵囊数一直低于免疫对照组，表明爱
绿爽对球虫的感染具有抑制作用，同时不影响球虫免疫力的建立，体现爱绿爽与疫苗联合使用具有一定的优势，在临床上能减少疫苗反应，在野毒存在条件下也能建立良好的免疫力。

3.1.2 地养鸡存活率、相对增重率和料肉比：

表3所示,地养黄羽肉鸡的存活率依次为爱绿爽不免疫组=化药对照组＞免疫对照组＞爱绿爽免疫组＞不处理对照组。不处理对照组存活率为94.3%，可能受外界球虫感染影响，所有试验组存活率均高
于不处理对照组。1-20日龄相对增重率方面由高到低为爱绿爽不免疫组＞爱绿爽免疫组＞免疫对照组＞化药对照组。21-50日龄以及1-50日龄相对增重率由高到低为化药对照组＞爱绿爽免疫组＞爱绿爽
不免疫组＞免疫对照组，从数据稳定性方面看爱绿爽免疫组表现更为稳定。

表4数据显示,地养鸡1-20日龄料肉比并无差异；21-50日龄料肉比由低到高为爱绿爽免疫组=化药对照组＜爱绿爽不免疫组＜免疫对照组=不处理对照组，这说明爱绿爽和疫苗联合使用提高了料肉比。

3.2 免疫后攻虫试验观察抗球虫效果指标

免疫后试验鸡转笼养并经口感染柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球虫强毒混合孢子化卵囊23万检验免疫保护效果，指标检测如下：

3.2.1 病变计分

表5显示，爱绿爽免疫组在肠道各部位的病变计分均低于免疫对照组和爱绿爽不免疫组，表明爱绿爽和疫苗联合使用即建立良好的免疫力，也减轻了球虫免疫产生的病变。

3.2.2 存活率、相对卵囊产量（ROP）、病变记分减少率（RLS）。

表6所示，存活率各试验组均高于阳性对照组；相对卵囊产量由低到高依次为爱绿爽免疫组＜免疫对照组＜化药对照组＜爱绿爽不免疫组。爱绿爽免疫组的卵囊产量最低。这说明爱绿爽和疫苗联合
使用建立了良好的免疫力，从而起到了良好的抗球虫效果。

病变减少率方面由低到高依次为化药对照组＜爱绿爽不免疫组＜免疫对照组＜爱绿爽免疫组，由此可见爱绿爽和疫苗联合使用可以大大减少鸡球虫疫苗反应及野毒虫株感染对肠道造成的损伤。

华南农业大学寄生虫教研室

项目人员：姜亚杰、张杭、蔡晓懿、陈晓丹、陆肖、范雪梅、冯诗喻、陈思彤

签审人：翁亚彪教授、林瑞庆研究员

时间：2019-12